La purificación de ADN consiste en separar el material genético de los componentes de una reacción in vitro o de fragmentos de gel de agarosa para obtener una muestra adecuada para análisis posteriores. Tras una amplificación mediante PCR o una digestión con enzimas de restricción, la mezcla puede contener cebadores, proteínas y sales capaces de interferir en las aplicaciones posteriores.
Los sistemas destinados a purificar fragmentos o concentrar ADN y ARN suelen inmovilizar el ácido nucleico sobre sílice o celulosa incorporada en membranas, resinas o perlas magnéticas, seguida de etapas de lavado y elución. La limpieza de los fragmentos de ADN puede mejorar la eficacia de las aplicaciones posteriores.
Importancia de la purificación de ADN
En una reacción de amplificación pueden aparecer productos inespecíficos de PCR y dímeros de cebadores que compiten con el producto de PCR deseado durante la ligación en la clonación mediante vectores T, lo que puede reducir la frecuencia de clones positivos. Por este motivo, la eliminación de componentes no deseados permite trabajar con una fracción de ADN más adecuada para la siguiente fase experimental.
En la secuenciación de Sanger, determinados componentes de la reacción interfieren en la obtención de datos si no se eliminan antes del análisis. Las sales del tampón pueden provocar una migración electroforética anómala, mientras que los terminadores marcados con colorante que no se han incorporado y las especies relacionadas interfieren con la señal legítima de los productos de extensión de la secuenciación.
Principio general del proceso
La purificación o concentración de fragmentos de ADN o de productos de PCR implica la separación del ADN respecto de los componentes de la reacción in vitro o de las porciones de gel de agarosa. Como en otros sistemas de purificación de ADN y ARN, los productos diseñados para purificar fragmentos o concentrar ADN o ARN suelen incluir la inmovilización del ácido nucleico sobre sílice o celulosa incorporada en membranas, resinas o perlas magnéticas, seguida de etapas de lavado y elución.
| Elemento de la reacción | Posible interferencia |
|---|---|
| Cebadores | Pueden acompañar al producto de PCR durante los análisis posteriores. |
| Proteínas | Forman parte de los componentes que pueden separarse del ADN. |
| Sales del tampón | Pueden provocar una migración electroforética anómala. |
| Productos inespecíficos de PCR y dímeros de cebadores | Pueden competir con el producto deseado durante la ligación en la clonación mediante vectores T. |
| Terminadores marcados con colorante no incorporados | Pueden interferir con la señal legítima de la secuenciación. |
Purificación después de PCR y digestión enzimática
Después de una amplificación mediante PCR o de una digestión con enzimas de restricción, los componentes de la reacción pueden inhibir el rendimiento de los análisis posteriores. La limpieza de los fragmentos de ADN puede mejorar la eficiencia de las aplicaciones posteriores.
La separación puede realizarse a partir de una reacción directa o de fragmentos recuperados de gel de agarosa. En ambos casos, el objetivo es conservar el ADN de interés y retirar sustancias que puedan alterar la ligación, la migración electroforética, la lectura de secuencias u otros procedimientos posteriores.
Relación con la investigación forense
Ricardo Ortega Ruiz es profesor de Antropología Forense en la Facultad de Criminología de la Universidad Isabel I y director del laboratorio de Antropología Forense del IFPCF. El 2 de junio de 2022 viajó hasta Túnez para estudiar los restos óseos de santos y mártires custodiados en la Catedral de Túnez.
El docente pudo analizar las reliquias de santos y mártires de la Iglesia Católica de este país desde la época romana hasta la época contemporánea con la colonia francesa en la región norafricana. También estudió restos óseos de una mártir condenada a ser decapitada y huesos de otros santos y mártires que se custodian en la seo de la capital tunecina, algunos de ellos procedentes de la región de Cartago.
Uno de los restos estudiados es un cráneo de una mártir decapitada que tuvo una vida compleja. “Sabemos que huyó de un matrimonio concertado y se refugió en un convento vestida de hombre hasta que fue descubierta y tuvo que someterse a un “juicio” en el que se la condenó a muerte, sobreviviendo a varios martirios previos”, explicó el experto en antropología forense.
Tras el análisis antropológico de los huesos se realizarán dos vías de investigación: por un lado, "el cráneo será reconstruido mediante arte forense para poner rostro a la mártir, mientras que se buscarán medios de datación absoluta, como el Carbono 14, para poder para certificar la antigüedad correctamente de los restos analizados", ha explicado Ricardo Ortega.
Datación mediante carbono 14
El método de datación por radiocarbono es una técnica basada en isótopos muy fiable para conocer la antigüedad de muestras orgánicas de menos de 50.000 años. El isótopo carbono-14 se produce de forma continuada en la atmósfera como consecuencia del bombardeo de átomos de hidrógeno por rayos cósmicos.
A través de una serie de procesos químicos se puede datar el momento de la muerte de un organismo vivo, ya que no se incorporan nuevos átomos de carbono-14 a los tejidos y la concentración de isótopo va decreciendo. En el estudio de restos humanos, esta técnica puede complementar el análisis antropológico y aportar información sobre la antigüedad de las muestras.
Arte forense y análisis de ADN
La aplicación del arte forense abarca una gran variedad de habilidades artísticas que se utiliza para prestar asistencia a las fuerzas de seguridad o en estudios de patrimonio histórico. Se basa en los aspectos visuales de un caso y se considera una herramienta eficaz para la antropología forense.
Esta disciplina se enfoca en el rostro humano con propósitos de identificación o reconstrucción. Para ello se utiliza la tecnología informática que permite crear una aproximación facial con imágenes 2D, en dibujos o 3D en esculturas.
Cuando se crea un modelo de rostro, el artista forense se ha basado previamente en el análisis antropológico para conocer si la persona es hombre o mujer, su edad en el momento de la muerte o su ascendencia, mientras que se busca corroborar mediante estudios de ADN, particularidades como su tono de piel, color de ojos o color de cabello.
Escaneo Laser 3D en la Fiscalía de Colombia - Reconstrucción Facial Forense
Trayectoria profesional de Ricardo Ortega Ruiz
Ricardo Ortega Ruiz es Facultativo Especialista de Área (F.E.A.) en la especialidad de Neumología. Es Doctor en Medicina y Cirugía por la Universidad de Sevilla desde abril de 1992.
Actualmente es Jefe de Sección de EPOC y Rehabilitación Respiratoria del Servicio de Neumología del Hospital “Virgen del Rocío” de Sevilla. También es investigador principal del grupo de investigación reconocido y financiado por el Plan Andaluz de Investigación de la Consejería de Educación y Ciencia de la Junta de Andalucía desde el año 1995.
Es coordinador del grupo de investigación EPOC, hipoxia y rehabilitación respiratoria, adscrito al Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBIS). Además, es componente de un grupo de investigación vinculado al CIBER de Enfermedades Respiratorias (CIBERES).
Es director del Programa de Investigación Integrada (PII) de Enfermedades Respiratorias y Rehabilitación de SEPAR e investigador principal de más de 40 proyectos de investigación nacionales e internacionales.
Actividad docente y científica
Ricardo Ortega Ruiz es tutor clínico de la Universidad de Sevilla. Ha sido profesor invitado en el curso de Intervención Sanitaria en Tabaquismo y profesor externo en el Máster Universitario en Investigación Biomédica.
También es profesor externo en el Máster Universitario en Experto propio de la Universidad de Granada en el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). Está acreditado como Profesor Contratado Doctor con Vinculación Clínica por la Agencia Andaluza del Conocimiento de la Junta de Andalucía.
Su actividad incluye más de 500 presentaciones a congresos y más de 200 publicaciones nacionales e internacionales. En septiembre de 2026 aparecen 4 documentos en Web of Science y 2 documentos en Scopus.
| Indicador | Dato |
|---|---|
| Proyectos de investigación nacionales e internacionales como investigador principal | Más de 40 |
| Presentaciones a congresos | Más de 500 |
| Publicaciones nacionales e internacionales | Más de 200 |
| Documentos en Web of Science | 4 |
| Documentos en Scopus | 2 |
| Citas en Scopus | 6 |
Áreas de investigación
Su actividad investigadora se vincula con la EPOC, la hipoxia y la rehabilitación respiratoria, así como con la investigación integrada en enfermedades respiratorias. Esta trayectoria combina asistencia clínica, investigación, docencia universitaria y participación en proyectos nacionales e internacionales.
La experiencia en investigación biomédica y la actividad desarrollada en antropología forense se relacionan con procedimientos científicos basados en el análisis de muestras, la interpretación de resultados y la aplicación de técnicas complementarias. En el estudio de restos humanos, el análisis antropológico puede integrarse con la datación absoluta, la reconstrucción facial y los estudios de ADN.
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